ELISA法
光度酶聯(lián)免疫分析常被稱為ELISA法，即酶聯(lián)免疫吸附分析。它zui早由Engvall和Perlmann與Van Weeman和Schuurs同時建立，并用于醫(yī)學研究。它利用酶標記物同抗原抗體復(fù)合物的免疫反應(yīng)與酶的催化放大作用相結(jié)合，既保持了酶催化反應(yīng)的敏感性，又保持了抗原抗體反應(yīng)的特異性，因而極大地提高了靈敏度。同時它又是一種非均相分析，即在反應(yīng)中的每一步都有洗滌過程，從而除去了未反應(yīng)物質(zhì)和干擾物質(zhì)。
ELISA是將抗原、抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)有機結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合性技術(shù)。它的基本原理是：使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；抗原或抗體與某種酶聯(lián)結(jié)成美標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體即保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，使受檢標本和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色產(chǎn)反應(yīng)的深淺進行定性分析或定量分析。由于酶的催化效率很高，往往一分子酶在1min內(nèi)可催化數(shù)十萬及至上千萬分子底物變?yōu)楫a(chǎn)物，故可極大地放大反應(yīng)信號，從而使測定方法達到很高的靈敏度。從以上的原理可知，整個ELISA試驗可分為三個部分：一是免疫學反應(yīng)過程，包括抗原、抗體、酶標記物之間的反應(yīng)；二是酶和底物反應(yīng)過程，可以使用不同的酶/底物系統(tǒng)；三是檢測方法的建立，可以利用已經(jīng)存在的各種分析手段，對酶催化反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物進行定量分析，根據(jù)產(chǎn)物的理化性質(zhì)，可采用分光光度法，也可采用熒光分析法、化學發(fā)光分析法、電化學分析法等分析方法。
N-US>?pn?? ?? yle='font-family:宋體;mso-ascii-font-family:"Times New Roman"; mso-hansi-font-family:"Times New Roman"'>或”酶標定量測試儀”,其實這是不確切的,因為在學術(shù)上”酶標”是指用一定的方式,使酶與抗體(或抗原)蛋白質(zhì)結(jié)合的過程.
一,ELISA測試儀的使用方法:應(yīng)將ELISA測試儀安裝于溫度,濕度相對穩(wěn)定的干燥,清潔,安靜的實驗室里,電源電壓可用交流電.使用時分校正儀器,測試樣品,清洗比色皿三個環(huán)節(jié).
校正儀器:1,關(guān)上光門,插入所需之濾光片,并將量程選擇開關(guān)轉(zhuǎn)到T”100%”處.2,接通電源,可見指示燈亮.3,預(yù)熱15min以上.4,將儀器由調(diào)”0”開關(guān)調(diào)到表頭指針為0.5,注入對照液,打開光門,調(diào)光量旋鈕使表頭指針為100%滿度.6,將量程轉(zhuǎn)到所需的A(光密度)量程范圍,用A旋鈕調(diào)至0.
測定樣品:1,安上抽液泵按鈕,抽去對照液.2,放下按鈕開關(guān),用微量移液管(又叫微量液體取樣器)注入樣品,即可讀數(shù),樣品測試程序由稀到濃.
清洗比色皿:開啟抽液泵,清洗比色皿3次以上,才可測試不同組分的樣品
二,與ELISA測試儀測定有關(guān)的輔助用具:ELISA測定中,其他有關(guān)的輔助用具有聚苯一乙烯塑料微量反應(yīng)板和微量液體取樣器.20世紀80年代,聚苯乙烯塑料微量反應(yīng)板由上海塑料制品三廠生產(chǎn),不同體積量的微量液體取樣器,由上海求精玻璃儀器廠等廠家生產(chǎn).聚苯乙烯塑料微量反應(yīng)板質(zhì)量與ELISA測試結(jié)果關(guān)系很大,尤其在使用四川第九儀表廠生產(chǎn)的ELISA測試儀時更為突出.
21世紀隨著科學技術(shù)的飛躍發(fā)展,ELISA測試儀的性能和外觀都發(fā)生了較大的變化.
