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伏安酶聯(lián)免疫分析法在其他方面的應用
更新時間:2012-02-08 點擊次數(shù):2380次

伏安酶聯(lián)免疫分析法在其他方面的應用

   乙型肝炎病毒抗原抗體的測定,病毒性肝炎主要包括甲型(HAV)乙性(HBV)和非甲非乙型三種,其中以乙型肝炎的危害性zui大。這是因為機體在感染了乙型肝炎病毒后,除急性表現(xiàn)外,尚有相當一部分轉(zhuǎn)化為慢性肝炎、無癥狀帶病毒者,其中一部分會將發(fā)展為肝硬化,甚至肝癌,導致死亡。因此對乙型肝炎的防治和尋找早期靈敏的診斷方法將很受關(guān)注。目前常用的分析方法有放射免疫分析法和ELISA法等。兩個伏安酶聯(lián)免疫分析體系應用于人血清中乙型肝炎病毒多種抗原抗體的電化學測定,取得了令人滿意的結(jié)果。

(1)       ODA-H2O2-HRP伏安酶聯(lián)免疫分析體系,采用雙抗體夾心法測定乙型肝炎表面抗原(HBsAg)測得線性范圍為1:1~1:384,檢測限為1:384,靈敏度是ELISA分光光度法的16倍。

采用雙抗原夾心法測定乙型肝炎表面抗體(HBsAb),測得線性范圍為1:1~1:256,檢測限為1:256,靈敏度是ELISA分光光度法的2倍。

乙型肝炎核心抗體(HBcAb)測定是采用異相競爭法進行的,測定得到的線性范圍是1:1~1:512,檢測限為1:512,靈敏度是ELISA分光光度法的2倍。 

乙型肝炎E抗原(HBeAg)的測定方法同HBsAb。測定得到的線性范圍是1:1~1:1024,檢測限為1:1024,靈敏度可達ELISA分光光度法的16倍。

乙型肝炎E抗體(HBeAb)的測定是乙型肝炎診斷的一項重要指標,采用競爭性抑制免疫反應對其進行測定。實驗結(jié)果,測得線性范圍為1:1~1:384,檢測限為1:384,靈敏度是ELISA分光光度法的,4倍。

同時,以ODA-H2O2-HRP伏安酶聯(lián)免疫分析體系對10份人血清樣品進行了測定,測定結(jié)果與ELISA分光光度法進行對照,結(jié)果*一致,兩者具有很好的相關(guān)性。

(2)       OT-H2  O2-HRP伏安酶聯(lián)免疫分析體系,乙型肝炎病毒5種抗原抗體的測定方法同ODA-H2O2-HRP體系,按照實驗方法對HBsAg、HBsAb 、HBcAbHBeAg HBeAb進行測定,所得的線性范圍分別為 1:1~1:512、1:1:~1:10241:1~1:1024、1:1~1:10241:1~1:1536,對應的檢測限分別為1:512、1:10241:1024、1:10241:1536,靈敏度分別是ELISA分光光度法的16倍、8倍、2倍、16倍和16倍。對人血清樣品分析的結(jié)果也與ODA-H2O2-HRP體系所測得結(jié)果*一致。

人血清鐵蛋白的測定

人血清鐵蛋白的測定(Ferritin)為一儲存及利用鐵的蛋白質(zhì),主要儲存于網(wǎng)狀肉皮系統(tǒng)及骨髓中。人鐵蛋白微量存在于血清中,但血清鐵蛋白濃度的水平及其變化可以反映體內(nèi)的鐵儲備,鐵蛋白的測定是缺鐵性貧血及肝癌的一項重要指標。因而較廣泛地用于臨床某些血液疾病的診斷及鑒別診斷。目前臨床檢測中測定鐵蛋白的常用方法有間接血凝試驗、雙擴散及ELISA等方法。OAP-H2O2-HRPMAP-H2O2-HRP、PAP-H2O2-HRP等伏安酶聯(lián)免疫分析測定人血清中鐵蛋白的新方法。該方法以線性掃描二階導數(shù)伏安法檢測HRP催化H2O2氧化電化學底物的產(chǎn)物,采用雙抗體夾心免疫分析法對鐵蛋白進行測定,靈敏度高于經(jīng)典的ELISA分光光度法。三個體系對鐵蛋白測定的線性范圍分別為0.2~320ng/ML、0.25~320 ng/ML、和0.2~320 ng/ML。用所建立的方法對人血清樣品進行測定,并與現(xiàn)行的ELISA分光光度法進行對照,二者相關(guān)性好。

 


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