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土壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測(cè)試劑盒

提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大小:
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詳細(xì)介紹

壤酸性轉(zhuǎn)化酶 (S-AI) 活性檢測(cè)試劑盒

見(jiàn)分光光度法

意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格:50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容

一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用;用不完的試劑 4℃保存; 試劑三液體 20mL×1 瓶,4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,4℃保存,10mg 無(wú)水葡萄糖。臨用前加入 1mL 試劑一溶解,制備 10mg/mL 萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用。

產(chǎn)品說(shuō)明

S-AI  pH 為 4.5~5.0  (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗 糖代謝關(guān)鍵酶之一

S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物 在 540nm 有特征光吸收,在一定范圍內(nèi) 540nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水、甲苯。

作步驟:

、樣品處理:

新鮮樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干,過(guò) 30~50  目篩。

、測(cè)定步驟及加樣表:

、光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min ,波長(zhǎng)調(diào)至 540nm ,蒸餾水調(diào)零。

、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋:將 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋至 、、0.8 、0.6 mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

、加樣表:

劑名稱

測(cè)定管

對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)管

白管

土樣 (g)

0.1

0.1

-

-

劑一 (μL)

-

800

-

800

劑二 (μL)

800

-

-

-

標(biāo)準(zhǔn)液 (μL)

-

-

800

-

甲苯 (μL)

20

20

20

20

混勻,37℃準(zhǔn)確水浴 1h 后,煮沸 10min 左右 (蓋緊,以防止水分散失) ,流水或冰浴冷

 


 

 

 

卻后充分混勻 (以保證濃度不變) ,10000rpm,常溫離心 10min,取上清 150μL 與 600μL  劑一混合即將上清液稀釋 5 倍。

上清稀釋液 (μL)

700

700

700

700

劑三 (μL)

300

300

300

300

,煮沸 10min 左右 (蓋緊,以防止水分流失) ,流水冷卻后充分混勻,540nm 處蒸餾水調(diào)

,記錄各管吸光值A ,記為 A 測(cè)定管、A 對(duì)照管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 空白管。計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照 ,ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。

三、S-AI 活性計(jì)算:

1 、  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

萄糖濃度為 x 軸,相應(yīng)的ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b;將ΔA  式得到 x  mg/mL)

2 、  S-AI 活性計(jì)算

單位義:37℃每 g 土壤每天產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI  (U/g=x×V 酶促÷W÷T

V 酶促:酶促反應(yīng)總體積,0.820mL;W:樣本鮮重,g;T:反應(yīng)時(shí)間:1/24d

注意事項(xiàng):

1 、如果加入試劑三,煮沸 10min 后有混濁物出現(xiàn),建議離心除去沉淀 (10000rpm ,2min ) ,取上 測(cè)定吸光度;

、如果吸光值大于 ,可以將上清液再進(jìn)行稀釋;若吸光值較小,可以減少上清液稀釋倍數(shù)。兩種 作均要注意改變公式中的稀釋倍數(shù)。


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