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土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)試劑盒說(shuō)明書(shū)

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詳細(xì)介紹

土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

產(chǎn)品內(nèi)容

試劑一:甲苯1mL×1 瓶,4保存;(自備)

試劑二:液體7.5mL×1 瓶,4保存;

試劑三:粉劑×1 瓶,4保存;臨用前每瓶加入22mL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑4保存;

試劑四:液體22mL×1 瓶,4保存。

產(chǎn)品說(shuō)明

S-SC 能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機(jī)體吸收,其酶促作用產(chǎn)物與土壤中有機(jī)質(zhì)、氮、

磷含量,微生物數(shù)量及土壤呼吸強(qiáng)度密切關(guān),是評(píng)價(jià)土壤肥力的重要指標(biāo)。

S-SC 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm 有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm 光吸收增加速率與S-SC 活性成正比。

自備用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、

研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

操作步驟

一、加樣表

試劑名稱

測(cè)定管

對(duì)照管

風(fēng)干土樣(g

0.03

0.03

試劑一(μL

5

5

振蕩混勻,使土樣全部濕潤(rùn),37水浴15min

試劑二(μL

75

75

試劑三(μL

220

 

蒸餾水(μL

 

220

充分混勻,放入37水浴培養(yǎng)24 小時(shí),10000 g,4,離心5min,取上清液

上清液(μL

85

85

試劑四(μL

215

215

充分混勻,95水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,蒸餾水稀釋10倍(可以吸取100μL,加入900μL 蒸餾水稀釋;若吸光度大于4,可以加大稀釋倍數(shù)),取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中510nm 處讀吸光值A。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

二、S-SC 活性計(jì)算:

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 4.9x -0.062;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。

單位的定義:每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)S-SC 活力單位。

S-SC 活力(U /g 土樣)=(A+0.062) ÷4.9×10×V 反總÷W÷T =20.4×(A+0.062)

10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時(shí)間,1d; V 反總:反應(yīng)體系總體積:0.3mL;W:樣本質(zhì)量,0.03g。

b. 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 2.45x -0.062;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。

單位的定義:每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)S-SC 活力單位。

S-SC 活力(U /g 土樣)=(A+0.062) ÷2.45×10×V 反總÷W÷T =40.8×(A+0.062)

10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時(shí)間,1d; V 反總:反應(yīng)體系總體積:0.3mL;W:樣品質(zhì)量,0.03g。

 

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