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細胞因子在體內(nèi)具有重要的病理作用
點擊次數(shù):976 更新時間:2022-11-08
    細胞因子在體內(nèi)具有重要的病理作用,在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下,部分細胞因子會明顯變化,根據(jù)這些指標可以判斷機體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應(yīng)評價,具有重要的應(yīng)用價值。廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的流式細胞術(shù)是細胞因子檢測的一種方法。
  CBA(cytometric bead array)法是新發(fā)展起來的利用流式細胞術(shù)測定細胞因子的新方法,該方法直接檢測分泌到細胞外的處于游離狀態(tài)的細胞因子。流式細胞術(shù)不能直接檢測細胞因子,CBA技術(shù)利用人工合成的微球(如直徑為7.5µm的聚苯乙烯微球)代替細胞,在該做球上包被細胞因子抗體,當(dāng)待測樣品中含有相應(yīng)的細胞因子時,人工微球上的抗體能夠與細胞因子結(jié)合,然后再加入PE偶聯(lián)的抗細胞因子抗體,該PE偶聯(lián)抗體就可以與微球上結(jié)合的細胞因子結(jié)合,形成“三明治夾心”結(jié)構(gòu)。其基本原理與ELISA法檢測細胞因子具有相似之處,只是ELISA法利用的是酶系統(tǒng),通過使底物顯色,計算顏色的深淺來定量細胞因子,而CBA能利用的是熒光系統(tǒng),通過激發(fā)PE熒光素,分析熒光信號的強弱來定量細胞因子。
  CBA穩(wěn)定性好、可重復(fù)性高,能避免酶聯(lián)免疫放大技術(shù)使信號失真導(dǎo)致的假陽性。
  流式細胞術(shù)檢測用于細胞因子檢測是一種相對快速、重復(fù)性好并能準確定量的方法。但由于胞內(nèi)分析步驟復(fù)雜,涉及變異因素多,可能會出現(xiàn)結(jié)果不穩(wěn)定,較難重復(fù)等問題。
  如在檢測血清時,由于血清成分復(fù)雜,細胞因子含量差距大,實驗中經(jīng)常會出現(xiàn)分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現(xiàn)象,對實驗結(jié)果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成,血清加入微球之后如果沒有充分渦旋,容易沉淀聚集,細胞因子不能充分跟微球結(jié)合,導(dǎo)致多群甚至聚集現(xiàn)象發(fā)生,檢測結(jié)果將是無效的。需要從制備混合微球開始到加入實驗管,直到上機檢測前每一步都必須充分渦旋,以避免微球發(fā)生聚集。

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