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Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒說明書
點擊次數(shù):2142 更新時間:2020-09-23

Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒說明書

                 

                                                                                            

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 

 

目錄號:K2574 

保存:2-8℃避光保存 

 

組分說明

 

                                              Cat.No.              K2574

                                               KitSize                50

                                         4×BindingBuffer             10ml

                                       PropidiumIodide,PI           500 μl 

                                          AnnexinV-FITC             250 μl

 

產(chǎn)品簡介 

 

    AnnexinV-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒是一種采用AnnexinV-FITC 與 PI 雙染法進行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂,正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面,在細(xì)胞發(fā)生凋亡時細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。AnnexinV具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性,對PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的,也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過性熒光染料碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)不能通過完整的活細(xì)胞,但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進行染色,因此通常將AnnexinV 與PI 配合染色,以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。

 

注意事項 

 

1.  本試劑盒需使用流式細(xì)胞儀進行檢測。

2.  需自備PBS 和去離子水。

3.  熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

4.  PI 對人體有刺激性,請注意適當(dāng)防護。

5.  請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

操作步驟 

 

1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:

    a. 對于貼壁細(xì)胞:小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞,至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打

下來時,加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細(xì)胞,并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g 左右離心3-5 分鐘,沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl 左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的    PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清。再次加入1ml4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

    b. 對于懸浮細(xì)胞:1000×g 左右離心3-5 分鐘,沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約 50 微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1 ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,并轉(zhuǎn)移到1.5 毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清,可以殘留約 50μl 左右的PBS,以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

2.  用去離子水按 1:4 稀釋BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml 去離子水);

3.  用 250μlBindingBuffer 重新懸浮細(xì)胞,調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml;

4.  取 100μl 的細(xì)胞懸液于5ml流式管中,加入5μlAnnexinV/FITC和10μl20μg/ml的PI 溶液;

5.  混勻后于室溫避光孵育15分鐘;

6.  在反應(yīng)管中加400μlPBS,流式細(xì)胞儀(FACS)分析。

    

     

實驗代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實驗服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務(wù)

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務(wù)實驗服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實驗

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實驗服務(wù)

ATP/ADP檢測實驗服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務(wù)

PKC活性檢測實驗

非標(biāo)定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

端粒酶活性檢測實驗

細(xì)胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務(wù)

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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